Тромбоциты по Фонио метод подсчета, преимущества и недостатки

Сдать анализ тромбоцитов, анализ крови на тромбоциты, подсчет тромбоцитов по Фонио, тромбоциты по Фонио

Сдать анализ тромбоцитов, анализ крови на тромбоциты

Анализ на тромбоциты входит в состав общего анализа крови (клинического анализа крови). Сдать анализ можно в утренние часы натощак (не менее 8 часов после последнего приёма пищи). Для анализа берется кровь из вены, в некоторых случаях возможен забор крови из пальца.

Пройти обследование можно любой из наших клиник. Мы работаем без выходных и праздников. Экспресс-анализы выполняются в будние и выходные дни от 1 часа.

Референсный интервал у взрослых мужчин и женщин зависит от лаборатории, в основном от 140-180 до 350-450 тысяч клеток /микролитр.

Снижение уровня ниже референсного интервала называется тромбоцитопенией. При выявлении тромбоцитопении назначаются необходимые дополнительные обследования, так как тромбоцитопения может быть связана с многими заболеваниями.

Уровень выше референсного интервала называют тромбоцитозов. Это состояние также требует дополнительных обследований.

Для расшифровки анализа обязательно обратитесь к врачу!

Подсчет тромбоцитов по Фонио, тромбоциты по Фонио в Лаборатории ЦИР

При выявлении тромбоцитопении или тромбоцитоза обязательно проводится оценка мазка крови под микроскопом по методу Фонио. Методика основана на подсчете числа этих клеток в окрашенном мазке крови на 1000 эритроцитов с пересчетом на 1 мл крови.

Во время подсчета тромбоцитов по Фонио исключается псевдотромбоцитопения, то есть ложное снижение уровня клеток, которое встречается в случае склеивания их между собой или наличия гигантских клеток. При оценке под микроскопом можно увидеть не только увеличенные клетки (макротромбоциты), но и микротромбоциты, анизоцитоз тромбоцитов (когда все клетки разного разного размера).

Методика подсчета по Фонио: в окрашенном мазке считают 1000 эритроцитов и все встретившиеся при этом тромбоциты. Так получают относительное число в промилле. Для вычисления абсолютного числа эту величину следует умножить на количество эритроцитов в 1 мкл и разделить на 1000.

Методы подсчета тромбоцитов

На этой странице находиться только текст статьи. Полная статья с картинками и таблицами находится здесь
Для просмотра требуется программа Adobe Reader.

Преимущества использования измерительного канала PLT­F на гематологических анализаторах серии XN в практике большой
централизованной лаборатории

Е.И. Казначеева, ООО «ИНВИТРО»

Данная статья посвящена проблеме корректного подсчета количества тромбоцитов в сложных случаях (ЭДТА­зависимая агрегация тромбоцитов, тромбоцитарный анизоцитоз, выраженный микроцитоз эритроцитов и/или присутствие эритроцитарных фрагментов (шизоцитов)) и возможным путям решения этой проблемы, применяемым в практике большой централизованной лаборатории.
Ключевые слова: PLT­F – канал – дополнительный измерительный канал на гематологических анализаторах Sysmex серии XN, позволяющий выполнять подсчет количества тромбоцитов методом проточной цитометрии, используя клеточно­специфичное флюоресцентное окрашивание. TAT (turn­around­time) образца – временной промежуток между поступлением исследуемого образца в лабораторию и моментом готовности результата.

The benefits of using the PLT­F channel (hematological analyzer SysmexXN)
in a routine practice of a big centralized laboratory
E.Kaznacheeva, «INVITRO LLC»
This article is dedicated to a problem of platelet count in «difficult» samples (EDTA­caused platelet aggregation, platelet anisocytosis, presence of microRBC or RBC­fragments) and possible decisions in a routine practice of a big centralized laboratory. PLT­F­channel – an additional measuring channel, that allows to perform the platelet count using the flow cytometry method with cell­specified staining. TAT (turn­around­time) of sample is the time between the sample arriving into the laboratory and the moment, when the result is complete.

Подсчет количества тромбоцитов – важная и неотъемлемая часть общего анализа крови. Для больших централизованных лабораторий основным методом подсчета количества тромбоцитов является импедансный метод, вследствие его несомненных достоинств: доступность (все гематологические анализаторы, независимо от измеряют количество тромбоцитов именно этим методом), высокая скорость выполнения исследования (0,5–2 минуты, в зависимости от модели анализатора), возможность автоматизации и маршрутизации информации об образце, невысокая себестоимость (исследование выполняется вместе со всеми остальными показателями общего анализа крови и требует дополнительных реагентов), возможность проведения адекватных процедур контроля качества (есть аттестованные контрольные материалы для ежедневного внутрилабораторного контроля качества, а также программы межлабораторного сличения). Однако, этот метод имеет и ряд ограничений в применении, которые перечислены в таблице 1.
Таким образом, для ряда образцов недостаточно использование только импедансного метода, требуется еще и дополнительное, уточняющее исследование, позволяющее исключить или подтвердить влияние ЭДТА­зависимой тромбоцитарной агрегации на результат и корректно подсчитать все тромбоциты, вне зависимости от их размера и без влияния на результат подсчета возможного присутствия микроцитов и шизоцитов.
До недавнего времени в арсенале лабораторий было всего два метода, которые можно было применить для уточняющего подсчета количества тромбоцитов в рутинной практике: подсчет в камере Горяева (прямой метод) и подсчет в окрашенном мазке (косвенный метод, относительно количества эритроцитов). Несмотря на то, что подсчет количества тромбоцитов в камере Горяева позволяет решить поставленные перед дополнительным исследованием задачи, он неприменим в практике большой централизованной лаборатории, так как является очень затратным по времени, плохо стандартизируемым методом без возможности четкой идентификации образца на аналитическом этапе и маршрутизации информации об образце. Таким образом, в качестве дополнительного, уточняющего метода мы применяли метод непрямого подсчета концентрации тромбоцитов в окрашенном мазке (по Фонио), который также позволяет исключить или подтвердить наличие тромбоцитарных агрегатов и подсчитать тромбоциты, вне зависимости от их размера, но при использовании которого образец однозначно идентифицируется на аналитическом этапе, а трудозатраты несколько ниже, чем при применении подсчета в камере Горяева.
В лаборатории общеклинических исследований клинико­диагностической лаборатории «ИНВИТРО­Москва» для выполнения общего анализа крови из венозной крови используются гематологические анализаторы Sysmex XN­серии, дополненные автоматическими станциями для изготовления и окраски гематологических мазков SP­1000. После выполнения исследования на гематологических анализаторах, для образцов, результаты которых соответствуют определенным условиям (количество тромбоцитов, полученное импедансным методом более 550 или менее 130 и/или присутствует сообщение о возможном аномальном распределении тромбоцитов по размеру), назначалось дополнительное выполнение подсчета тромбоцитов «по Фонио» и изготавливался и окрашивался мазок. Назначение дополнительных исследований и изготовления мазка производилось в рамках системы правил программы Extended IPU, управляющей работой анализаторов Sysmex и предоставляющей доступ к информации среднему и врачебному медицинскому персоналу, а также обеспечивающей передачу итоговых результатов в ЛИС. Таким образом была обеспечена однозначная идентификация исследуемых образцов на всех этапах выполнения исследования, а также маршрутизация информации о них. Однако, принимая во внимание большое количество образцов (более 4000 в день), подобный алгоритм, несмотря на его четкость и прозрачность, также не был идеальным для использования в практике большой централизованной лаборатории: образцов, соответствующих перечисленным выше критериям было свыше 200 в день, что приводило к высокой загруженности врачей­микроскопистов, при этом скорость выполнения исследований было невелика, и для более, чем 50% образцов, для которых был применен уточняющий метод подсчета количества тромбоцитов, результат был готов только спустя 8 и более часов с момента поступления образца в лабораторию. Таким образом, перечисленные выше недостатки используемого нами метода заставили нас искать другие способы уточняющего подсчета концентрации тромбоцитов, которые без потери качества выполнения исследования позволили бы ускорить процесс его выполнения, а также снизили бы нагрузку на врачебный персонал.
Несколько лет назад в нашей лаборатории уже была предпринята попытка заменить подсчет тромбоцитов «по Фонио» подсчетом тромбоцитов во флюоресцентном канале одновременно с подсчетом доли ретикулоцитов. Проведенные исследования показали, что данный метод позволяет получить корректные данные для образцов с аномальным распределением тромбоцитов по размеру, а также для образцов, в которых присутствуют микроциты и шизоциты, однако чувствительность метода к наличию в образце тромбоцитарных агрегатов оказалась недостаточной, и заменить подсчет «по Фонио» подсчетом тромбоцитов флюоресцентным методом в ретикулоцитарном измерительном канале мы не смогли.
В 2016 году появилась информация о том, что корпорация Sysmex готова представить новый измерительный канал, предназначенный специально для подсчета тромбоцитов флюоресцентным методом. В сотрудничестве со специалистами компании Sysmex мы запланировали проведение исследований аналитических характеристик этого канала, а также возможности его использования в рутинной практике. В начале 2017 года на одном из анализаторов XN1000, используемом в КДЛ «ИНВИТРО­Мск», был активирован PLT­F канал, и в течение 2 месяцев на нем было измерено более 3000 образцов крови со следующими характеристиками:
1. Количество тромбоцитов менее 130 или больше 550;
2. Присутствует «фдаг» об аномальном распределении тромбоцитов;
3. Количество тромбоцитов менее 180, средний объем эритроцита ниже 80 фл;
4. Любое количество тромбоцитов, но присутствует «флаг» о наличии фрагментов эритроцитов.
Для каждого из этих образцов было получено три результата: результат подсчета импедансным методом, результат подсчета из PLT­F канала, результат подсчета концентрации тромбоцитов в окрашенном мазке. После анализа полученных данных выяснилось следующее:
1. Для проб с низким количеством тромбоцитов без «флагов» о наличии аномального распределения тромбоцитов и тромбоцитарных агрегатов количества тромбоцитов, полученные всеми тремя методами практически совпадали;
2. Для всех образцов с тромбоцитарными агрегатами, обнаруженными в окрашенном мазке, каналом PLT­F был сгенерирован «флаг» о наличии тромбоцитарных агрегатов, при этом в небольшом количестве проб с «флагом» о наличии тромбоцитарных агрегатов из PLT­F – канала при микроскопии окрашенного мазка тромбоцитарные агрегаты обнаружены не были;
3. Для образцов с «флагами» об аномальном распределении тромбоцитов и присутствии эритроцитарных фрагментов результат, полученный из PLT­F канала, совпадал с результатом подсчета в мазке, тогда как результат, полученный импедансным методом для ряда образцов оказался некорректен.
Таким образом, был сделан вывод о возможности использования PLT­F канала в рутинной практике нашей лаборатории для дополнительного подсчета количества тромбоцитов в образцах, соответствующих приведенным выше критериям. Алгоритм уточнения количества тромбоцитов после измерения импедансным методом стал выглядеть следующим образом: образцы, удовлетворяющие одному или нескольким из четырех приведенных выше условий, дополнительно измеряют в PLT­F канале. Если полученный результат больше 30 и не сопровождается флагом о присутствии тромбоцитарных агрегатов – он подтверждается и передается в ЛИС. Если присутствует флаг о возможном присутствии тромбоцитарных агрегатов – выполняется верификация их наличия в окрашенном мазке, и результат выдается с примечанием о его некорректности. Если измеренное в PLT­F канале количество тромбоцитов менее 30 – также проводится микроскопия окрашенного мазка. Это позволило отказаться от микроскопического исследования более, чем для 85% образцов, исследованных в PLT­F­канале. Данные по сравнению TAT для образцов с количеством тромбоцитов ниже 130 после внедрения PLT­F канала с данными для аналогичных образцов до внедрения PLT­F канала представлены в таблице №2.
Использование PLT­F канала позволило существенно ускорить выполнение общего анализа образцов венозной крови с патологическим количеством тромбоцитов, а также снизило нагрузку на врачебный персонал. В настоящее время два гематологических анализатора Sysmex, работающие в лаборатории общеклинических исследований клинико­диагностической лаборатории «ИНВИТРО­Москва» оснащены этим измерительным каналом.

Читайте также:  Чудо Доктор - клиника на Школьной 11 телефон, отзывы

Подсчет количества тромбоцитов в крови — подробно о методиках

Когда нужен анализ крови с подсчетом тромбоцитов?

Клинический анализ крови с подсчетом тромбоцитов проводится в следующих случаях:

  • диспансеризация человека с проведением общего анализа крови для профилактики появления различных заболеваний;
  • симптомы повышенного количества тромбоцитов, вследствие которых может произойти закупорка сосуда (повышенное давление, онемение конечностей);
  • клинические проявления сниженного количества кровяных пластинок (постоянное появление синяков и гематом, бледность кожных покровов);
  • проведение повторного анализа, если первый тест показал нарушение.

Во всех перечисленных случаях необходимо обратиться к врачу для проведения общего осмотра. Он назначит методику, которая будет наиболее приемлемой для пациента, чтобы правильно поставить диагноз.

Методы подсчета тромбоцитов в крови

Выделяют три методики для подсчета кровяных пластинок в капиллярной крови:

  • использование камеры Горяева;
  • методика по Фонио;
  • использование полуавтоматического анализатора.

Все методики применяются в клинических учреждениях. Каждая из них имеет положительные и отрицательные стороны. Возможен подсчет тромбоцитов ручным методом для просмотра их формы и размера. Если врач будет сомневаться в точности результата, он может назначить подсчет клеток с помощью полуавтоматического анализатора.

Унифицированные методы подсчета тромбоцитов

Унифицированными является методики, которые считаются более точными. Для подсчета кровяных пластинок таким тестированием является методика по Фонио и применение камеры Горяева.

С помощью анализов можно не только почитать точное число клеток, но и изучить их строение. Возможно определение раковых атипичных клеток.

Ручной подсчет тромбоцитов в крови

К анализам с ручным подсчетом тромбоцитов относятся использование камеры Горяева и метода по Фонио. Для обоих исследований осуществляется подсчет тромбоцитов в мазке под микроскопом. Полученные цифры подставляют в формулу, с помощью которой результат из 1 мкл переводится на 1 л крови.

Читайте также:  Тревожные расстройства или невроз

Подсчет тромбоцитов в камере Горяева

Для подсчета тромбоцитов по методике Горяева необходимо приготовить раствор, состоящий из следующих веществ:

  • реактив 1 (кокаина гидрохлорид 3 г, натрия хлорид 0,25 г, фурацилин 0,25 г, дистиллированная вода 100 мл);
  • Реактив 2 (раствор оксалата аммония 1%).

Чаще всего применяют раствор оксалата аммония. Он эффективно уничтожает эритроциты, возможен свободный подсчет кровяных пластинок.

Рекомендуется для исследования выбирать венозную кровь. При использовании капиллярной биологической жидкости повышается риск образования сгустка. Если произойдет агрегация тромбоцитов, корректный подсчет количества тромбоцитов будет невозможен. К крови добавляют раствор ЭДТА, который препятствует образованию сгустка.

В пробирку наливают 0,02 мл крови, добавляют 4 мл реагента 1 или 2. Получившуюся массу перемешивают. В течение 30 минут должен произойти полный гемолиз красных кровяных телец. Пипеткой отбирают полученную жидкость, добавляют в камеру Горяева.

Внимание! Для осаждения кровяных пластинок камеру Горяева с жидкостью помещают во влажную среду. Кладут счетную камеру под микроскоп и подсчитывают форменные элементы.

Тромбоциты считают в 25 больших квадратах. Для этого микроскоп перемещают слева направо, вниз, справа налево. Кровяные пластинки под микроскопом выглядят, как небольшие фиолетовые точки.

Полученное значение подставляют в формулу подсчета тромбоцитов в мазке:

X=a×250×200/25

  • X – число тромбоцитов на 1 мкл биологической жидкости;
  • a — количество тромбоцитов в 25 квадратах;
  • 200 – разведение крови;
  • 25- количество квадратов;
  • 1/250 – объем одного квадрата.

После завершения методики все используемые приспособления дезинфицируют с помощью этилового спирта.

Подсчет тромбоцитов в мазке крови (по Фонио)

Для методики используют капиллярную кровь, взятую из пальца. Ее помещают в капилляр, добавляют один из следующих реактивов, препятствующих образованию сгустка:

  • раствор ЭДТА 2, 6%;
  • раствор сульфата магния 14%.

Жидкость необходимо тщательно перемешать. Каплю разведенной крови добавляют на предметное стекло, размазывает пластиковым шпателем. Полученный мазок фиксирует с помощью метода по Романовскому-Гимзе.

Читайте также:  Кеторол; инструкция по применению, описание, вопросы по препарату

Важно! Время фиксации зависит от применяемого реактива. Для ЭДТА оно составляет 40 минут, для сульфата магния — до 3 часов.

Мазок рассматривают под микроскопом, считают эритроциты и тромбоциты до получения значения, равного 1 тыс. Необходимо перемещать микроскоп слева направо, вниз, справа налево до тех пор, пока не будет достигнута данная цифра.

Для пересчета количество тромбоцитов 1 мкл на 1 литр крови число эритроцитов и тромбоцитов перемножают, делят на 1 тысячу.

Подсчет тромбоцитов в анализаторе

Для метода подсчета количества тромбоцитов используют капиллярную или венозную кровь. Добавляет антикоагулянт, чтобы она не свернулась. Если это произойдет, потребуется повторное изъятие биологической жидкости. Жидкость подносят к полуавтоматическому анализатору, который забирает объем жидкости, равный 1 мл.

Прибор самостоятельно подсчитывает данные, выдавая их на бланке исследования. Читайте о домашних анализаторах крови.

Какой способ подсчета тромбоцитов лучше?

С помощью подсчета показателя на мазке возможно визуально определить параметры клеток. Выявляется их размер, форма, патологические образования. Врач может ошибиться при подсчете или прокрасить мазок неправильно. В первом случае возможна постановка ошибочного диагноза. Для его подтверждения потребуется повторное исследование.

Внимание! Полуавтоматический анализатор в точности подсчитывает количество клеток, редко выдает ошибочный результат по этому параметру. Но аппарат не сможет рассмотреть параметры клеток, их атипичность.

Рекомендовано сначала проводить подсчет тромбоцитов вручную, затем исследовать их на полуавтоматическом анализаторе.

Ошибки при подсчете тромбоцитов

Возможны следующие ошибки в подготовительном этапе и проведении анализа:

  • отсутствие подготовки пациента в виде диеты, ограничения физической активности и времени сдачи исследования;
  • использование первой капли крови для проведения анализа (по правилам ее стирают водой, так как в ней содержится большое число форменных элементов);
  • отсутствие добавления антикоагулянта, который препятствует образованию сгустка;
  • ошибка в покраске мазка (использование просроченных или некачественных реактивов, укороченное или чрезмерно продолжительное время воздействие краски);
  • ошибки в подсчете клеток.

Для идентификации заболевания или его профилактики необходимо раз в год проходить обследование крови. Одним из тестирований является подсчет тромбоцитов. Для этого используют ручной подсчет или применение специализированного аппарата. Обе методики имеют плюсы и минусы, рекомендуется проводить их по очереди для подтверждения диагноза и отсутствия возможной ошибки. После получения данных обращаются к врачу. Только он сможет правильно расшифровать данные, назначив лечение при выявлении нарушений.

Екатерина Беликова, врач лабораторной диагностики, специально для Mirmam.pro

Полезное видео

Ссылка на основную публикацию
Требования подготовки к сдаче анализа кала — 11-я городская поликлиника г
Кальпротектин (Fecal Calprotectin) Специальной подготовки не требуется. Ограничений в диете и приеме лекарственных препаратов нет. Прием биоматериала производится в стерильном...
Трава подорожник лечебные свойства и противопоказания
Лечебные свойства подорожника: польза и вред для здоровья человека, применение при различных заболеваниях + рецепты настоев Уважаемые читатели, приветствую вас...
Трава пол-пала от камней в почках – народный способ очистить почки
Пол-пала (Эрва шерстистая): описание, состав, свойства, показания, инструкция по применению, противопоказания Сайт предоставляет справочную информацию исключительно для ознакомления. Диагностику и...
Тревоги и страхи — Mental Health Center
Тревога, страх, учащенное сердцебиение. Возможно, вегетативная дистония Вегетативная дистония (иной раз именуемая как соматоформная вегетативная дисфункция) – диагноз, о котором...
Adblock detector